Selain menjadi Ibu Negara, Ani juga pernah memegang jabatan Wakil Ketua Umum DPP Partai Demokrat. Ia aktif dalam kegiatan sosial di Persit Kartika Chandra Kirana (Persatuan Istri Tentara), Dharma Pertiwi, dan Dharma Wanita selama suaminya menjabat sebagai Menteri Pertambangan dan Energi pada era Pemerintahan Abdurrahman Wahid dan Menteri Koordinator Politik dan Keamanan era Pemerintahan Megawati Soekarnoputri.
Ani Yudhoyono meninggal dunia pada 1 Juni 2019 akibat kanker darah yang ia alami sejak 2 Februari 2019. Ia dimakamkan pada 2 Juni 2019 di TMP Kalibata, Jakarta. Ani Yudhoyono dikenal sebagai sosok yang berdedikasi dalam kegiatan sosial dan politik, serta sebagai pendamping dan ibu negara yang mendukung suaminya selama menjabat sebagai Presiden Indonesia.