Film komedi American Reunion mengambil latar sembilan tahun setelah Jim Levenstein dan Michelle menikah. Setelah kelahiran putra mereka yang kini berusia dua tahun, kehidupan rumah tangga Jim dan Michelle mulai terasa monoton, terutama dalam urusan hubungan intim. Sementara itu, kehidupan sahabat-sahabat lama mereka juga berubah.

Kevin Myers kini menjadi suami yang mengurus rumah sekaligus bekerja sebagai arsitek, Chris 'Oz' Ostreicher menjadi komentator olahraga terkenal yang sedang berpacaran dengan supermodel bernama Mia, dan Paul Finch sibuk berkeliling dunia.

Keempat sahabat itu akhirnya kembali ke kampung halaman mereka di East Great Falls, Michigan, untuk menghadiri reuni SMA yang ke-13 tahun. Tanpa diduga, Steven Stifler ikut muncul, padahal mereka sebenarnya berharap bisa menghindarinya.

Di sana, Jim bertemu Kara, mantan tetangganya yang dulu sering ia asuh saat masih kecil. Kara mengundang Jim ke pesta ulang tahunnya yang ke-18, dan dengan ragu Jim pun menerima undangan tersebut.

Keesokan harinya, mereka menghabiskan waktu di danau bersama Michelle dan temannya, Selena, yang langsung akrab dengan Finch. Kevin dan Oz juga kembali bertemu mantan pacar mereka saat SMA, Vicky dan Heather. Oz bahkan diperkenalkan pada pacar baru Heather bernama Ron.

Keributan terjadi ketika pacar Kara, AJ, mencuri atasan bikini milik Mia dan beberapa wanita lain sebelum kabur dengan jet ski. Para pria itu kemudian mengejar AJ dan teman-temannya ke pantai terdekat. Di sana, Jim tanpa sengaja mendengar AJ membual tentang rencananya merebut keperawanan Kara. Mendengar itu, Stifler menghancurkan jet ski mereka sebelum kelompok Jim akhirnya melarikan diri.

Alih-alih menghabiskan waktu bersama Michelle, Jim justru ikut teman-temannya pergi ke air terjun tempat pesta Kara berlangsung. Di pesta itu, Ron yang merasa tidak puas dengan Heather malah mengusulkan ide bertukar pasangan kepada Oz, yang langsung merasa jijik dengan usulan tersebut.

Dalam keadaan mabuk, Kara mencoba merayu Jim, tetapi Jim menolaknya. Ketika Kara akhirnya pingsan, Jim meminta bantuan Stifler, Finch, dan Oz untuk mengalihkan perhatian orang tua Kara sementara ia diam-diam mengantarkan Kara kembali ke kamarnya.

Setelah itu Jim pulang ke rumah dan langsung tertidur, membuat Michelle semakin merasa sedih dan kecewa dengan kondisi pernikahan mereka. Keesokan paginya, Kevin terbangun di tempat tidur bersama Vicky dan mengira mereka melakukan hubungan intim dalam keadaan mabuk. Namun Vicky menegaskan bahwa hal itu tidak terjadi, sekaligus merasa tersinggung karena Kevin mengira ia akan melakukan hal seperti itu.