Birds of Prey membuka cerita dengan kekacauan yang khas Harley Quinn, dan film yang dibintangi Margot Robbie, Mary Elizabeth Winstead, Jurnee Smollett, Rosie Perez, dan Ewan McGregor ini membawa kita masuk ke petualangan penuh warna dari sisi paling liar Gotham. Film ini mengikuti kondisi Harley empat tahun setelah kekalahan Enchantress, tepat saat Joker memutuskan hubungan dan menendangnya keluar dari hidupnya. Harley yang galau memulai hidup baru dengan tinggal di restoran milik Doc, memotong rambutnya, memelihara hyena berbintik, dan ikut roller derby untuk melampiaskan energi yang berlebihan.

Kisah kemudian membawa kita ke sebuah klub malam milik Roman Sionis, bos kriminal yang ambisius dan brutal. Di sana, Harley yang sedang mabuk membuat ulah sampai-sampai ia melumpuhkan sopir Roman. Kita juga diperkenalkan dengan Dinah Lance, penyanyi burlesque dengan kemampuan bertarung yang bikin takjub. Dinah bahkan sempat menyelamatkan Harley dari upaya penculikan. Roman yang terkesan dengan kemampuan Dinah kemudian menunjuknya sebagai sopir baru, sebuah keputusan yang menyulut rangkaian kekacauan berikutnya. Dalam momen frustrasi, Harley lalu meledakkan pabrik Ace Chemicals sebagai cara dramatis untuk mengumumkan putus dari Joker. Sejak itu, seluruh kriminal Gotham merasa bebas memburunya karena ia sudah tidak berada di bawah perlindungan sang badut kriminal.

Sementara itu, Detektif Renee Montoya dari GCPD sedang mengusut kasus pembunuhan anggota mafia yang dilakukan seorang vigilante bersenjata crossbow. Dinah sempat ditawari menjadi informan, namun ia menolak karena masa lalu kelam yang tak pernah dibantu polisi. Di sisi lain, Roman mengirim Dinah dan tangan kanannya yang sadis, Victor Zsasz, untuk mengambil sebuah berlian yang menyimpan nomor rekening warisan keluarga kriminal Bertinelli. Berlian itu justru dicopet Cassandra Cain, seorang remaja yang akhirnya menelan benda berharga itu setelah tertangkap polisi.

Harley, yang dikejar banyak musuh sekaligus, akhirnya ditangkap anak buah Roman dan dipaksa mengambil berlian itu kembali demi nyawanya sendiri. Roman bahkan memasang bounty besar untuk Cass. Dengan gaya heboh khas Harley, ia menerobos kantor GCPD menggunakan pelontar granat berisi cat dan glitter sebelum membawa lari Cass. Keduanya bersembunyi di apartemen Harley dan perlahan membangun hubungan yang lebih lembut dibanding dunia brutal Gotham. Namun ketenangan itu hancur ketika tempat tinggal Harley dibom oleh para kriminal yang mengincar Cass. Doc pun mengaku bahwa ia terpaksa menjual informasi tentang Harley.