Pada tahun 1999, The Bride, mantan anggota Deadly Vipers Assassination Squad, sedang berlatih untuk pernikahannya dengan Tommy Plympton di sebuah kapel di El Paso, Texas. Deadly Vipers yang dipimpin Bill menyerang kapel tersebut dan menembaki semua orang. Saat The Bride tergeletak terluka, dia memberi tahu Bill bahwa dia adalah ayah dari anak yang dikandungnya, tepat sebelum Bill menembaknya di kepala. Polisi yang menyelidiki pembantaian itu kemudian menemukan The Bride masih hidup, namun dalam kondisi koma.

Di rumah sakit, Elle Driver yang menyamar, salah satu anggota Deadly Vipers, mencoba meng-eutanasia The Bride. Bill membatalkan misi itu di detik terakhir, menganggapnya tidak terhormat membunuhnya saat tak berdaya. Empat tahun kemudian, The Bride terbangun dan terkejut mengetahui bahwa kandungannya telah hilang. Dia merobek lidah seorang pria yang berniat memperkosanya, lalu menikamnya sampai tewas, kemudian menggunakan pintu untuk menghantam kepala seorang pekerja rumah sakit yang telah menjual tubuhnya saat dia koma. Dia mengambil truk pekerja rumah sakit itu dan bersumpah akan membunuh Bill dan anggota Deadly Vipers lainnya.

The Bride pergi ke rumah Vernita Green, mantan anggota Deadly Vipers yang kini menjalani kehidupan normal di pinggiran kota. Mereka terlibat dalam pertarungan pisau, yang terhenti ketika putri Vernita yang masih kecil pulang ke rumah. Saat Vernita mencoba menembak The Bride dengan pistol yang disembunyikan di kotak sereal, The Bride menusuknya ke jantung dengan pisau lempar; menyadari putri Vernita secara tak sengaja menyaksikan kematian ibunya, The Bride memberitahunya bahwa dia akan menunggu jika putri itu ingin membalas dendam.

Dua bulan sebelumnya, The Bride pergi ke Okinawa untuk mendapatkan pedang dari pandai besi legendaris Hattori Hanzō, yang telah bersumpah untuk tidak membuat pedang lagi. Setelah mengetahui bahwa targetnya adalah Bill, mantan muridnya, Hattori membuatkan pedang terbaik untuk The Bride.