Tahun 1936, arkeolog asal Amerika, Indiana Jones, berhasil menemukan Patung Emas di sebuah kuil kuno di Peru yang penuh jebakan berbahaya. Tapi sebelum bisa membawanya pulang, ia dihadang oleh rival lamanya, Rene Belloq, yang merebut patung itu tepat di depan matanya. Tak ingin tertangkap, Jones kabur menggunakan pesawat amfibi yang sudah menunggunya.

Sesampainya di Amerika, dua agen intelijen datang membawa kabar penting: pasukan Nazi sedang menggali situs di Tanis, Mesir. Nama mantan mentor Jones, Abner Ravenwood, disebut dalam telegram mereka.

Dari situ, Jones menyimpulkan bahwa Nazi tengah memburu Tabut Perjanjian, artefak suci yang dipercaya Hitler bisa membuat tentaranya tak terkalahkan. Para agen pun meminta Jones untuk menemukannya terlebih dahulu sebelum pihak Nazi melakukannya.

Namun, apakah medali tersebut benar-benar kunci untuk menemukan Tabut Perjanjian? Dan seberapa jauh Jones harus bertaruh nyawa demi artefak yang bisa mengubah jalannya sejarah dunia?